一、為何選擇大腸桿菌做“偵察兵”

病人、病畜或帶菌者的糞便中，病原菌數(shù)量稀少且培養(yǎng)條件苛刻，直接檢測如同大海撈針。大腸桿菌卻與糞便“形影不離”，且培養(yǎng)方法成熟、特征明顯。我國《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》明確規(guī)定：每升飲用水中大腸桿菌不得超過3個，超過此限值即提示水體可能存在腸道致病菌，必須立即采取消毒或停供措施。

二、濾膜法思路——讓液體過去，把細(xì)菌留下

核心工具是一張孔徑0.45 μm的醋酸纖維濾膜。大腸桿菌直徑約1 μm，無法穿膜；在負(fù)壓作用下，水樣迅速通過，菌體被截留。將膜直接貼在含伊紅美藍(lán)（EMB）的選擇培養(yǎng)基上，37℃孵育20–24小時，目標(biāo)菌分解乳糖產(chǎn)酸，與染料形成黑色或紫黑色金屬光澤菌落，一眼可辨。

三、六步閉環(huán)操作（現(xiàn)場可移動式）

膜前處理——三次“熱水浴”

將濾膜置于燒杯，加蒸餾水沸煮15 min，換水再重復(fù)兩次，每次換水前輕搖2–3次，徹底去除膜內(nèi)殘留溶劑和抑菌劑，避免抑制菌落生長。

濾器滅菌——火焰＋高壓雙保險

金屬濾器可用酒精棉球火焰滅菌3圈；若時間充裕，用紗布＋牛皮紙包裹，121℃高壓蒸汽滅菌20 min，冷卻后立即使用，保證無菌環(huán)境。

負(fù)壓抽濾——-0.4 bar的“瞬間捕捉”

用無菌鑷子夾膜邊緣，粗糙面朝上，平鋪于濾器底座；旋緊漏斗，倒入水樣，開啟真空泵維持-0.4 bar（約-40 kPa）。樣液流盡后再抽氣5秒，確保膜面無明顯液體殘留，減少菌落擴(kuò)散。

貼膜培養(yǎng)——“零氣泡”原則

鑷子夾膜迅速轉(zhuǎn)移至EMB平板，截留面向上，完全貼合培養(yǎng)基，禁止夾入空氣；同一水樣平行做2–3皿，倒置放入37℃恒溫箱，20–24 h后觀察。

菌落識別——黑色即目標(biāo)

大腸桿菌在EMB上呈黑色或紫黑色，金屬光澤明顯；其他非乳糖發(fā)酵菌為無色或淡粉色。只計黑色菌落，避免誤判。

結(jié)果計算——一分鐘出數(shù)

公式：（平均黑點數(shù) × 稀釋倍數(shù)）÷ 取樣體積（mL）= 大腸桿菌群數(shù)（CFU/mL）。

稀釋思路：預(yù)計菌量>100 CFU時，用無菌水做10倍系列稀釋，確保單皿菌落30–300之間，誤差最小。

四、快速記憶口訣

“膜煮三遍→器火滅菌→負(fù)壓抽干→零氣泡貼膜→37℃孵黑→數(shù)點報數(shù)”——六步連貫，糞便污染指示菌一膜了然。

五、常見陷阱提示

膜面殘留液體：導(dǎo)致菌落擴(kuò)散成條帶，需延長抽氣時間。

培養(yǎng)基干裂：平板預(yù)先回溫，避免膜與基面脫離。

稀釋不夠：黑點數(shù)>300，需回爐重做10倍稀釋。

火焰滅菌未冷卻：熱濾器燙膜，孔徑變形，細(xì)菌穿膜而過。

掌握以上細(xì)節(jié)，即可在戶外移動實驗室完成“取樣-培養(yǎng)-計數(shù)”全程，30分鐘動手，20小時孵育，1分鐘讀數(shù)，輕松實現(xiàn)飲用水、海水、廢水的大腸桿菌群快速監(jiān)測。

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